熒光顯微鏡使用方法和操作規(guī)程

1.用窗簾遮蔽光線，關(guān)閉房間內(nèi)的燈光，除去顯微鏡的防塵罩，確保顯微鏡燈室通風(fēng)良好、無(wú)遮蓋。裝上汞燈燈箱，并轉(zhuǎn)動(dòng)燈箱卡圈上的撥桿，將燈箱與鏡臂連接。

2.將汞燈燈箱的電源插頭插入熒光電源箱后的插座，再將熒光電源箱的插頭插入220V外接電源。

3.打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，電壓表顯示出電源電壓，如電源電壓波動(dòng)不大于額定電壓值的±5%，即可按下啟動(dòng)開(kāi)關(guān)點(diǎn)燃汞燈，如因天氣太冷或電壓不穩(wěn)定等原因，一次啟動(dòng)未點(diǎn)燃汞燈，可以多撳動(dòng)幾次。待超高壓汞燈弧光達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)并達(dá)到最大發(fā)光效率，即可開(kāi)始工作。

4.燈泡的調(diào)中

（1）任選一塊標(biāo)本放在載物臺(tái)上.

（2）轉(zhuǎn)動(dòng)鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移出光路，轉(zhuǎn)動(dòng)濾色片組轉(zhuǎn)換手輪，將紫光（Ｖ）或藍(lán)光（Ｂ）或綠光（Ｇ）激發(fā)濾色片組轉(zhuǎn)入光路，并將10×熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路。

（3）調(diào)節(jié)粗微調(diào)手輪，將標(biāo)本像調(diào)焦清晰。

（4）前后推動(dòng)垂直照明器右邊的聚光鏡調(diào)焦推桿，使視場(chǎng)光欄成像清晰，轉(zhuǎn)動(dòng)視場(chǎng)光欄撥桿將視場(chǎng)光欄收小，調(diào)節(jié)視場(chǎng)光欄調(diào)中螺釘使視場(chǎng)光欄居中，然后再將視場(chǎng)光欄開(kāi)至最大。

（5）轉(zhuǎn)動(dòng)鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移入光路，前后調(diào)節(jié)燈箱上的聚光鏡撥桿，使汞燈的弧光在視場(chǎng)內(nèi)成像清晰。

（6）調(diào)整燈箱上的燈泡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘，使汞燈的弧光居中。

（7）調(diào)整反光鏡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘，使光源的反射像與汞燈的弧光分開(kāi)。

（8）轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡旋鈕把聚光鏡移出光路，此時(shí)視場(chǎng)照明均勻。

5.熒光觀察

（1）將熒光染色標(biāo)本放到載物臺(tái)上。

（2）將10×平場(chǎng)物鏡或40×熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路，調(diào)節(jié)載物臺(tái)縱橫移動(dòng)手輪，將標(biāo)本移入光路。

（3）轉(zhuǎn)動(dòng)濾光片轉(zhuǎn)換撥輪，將熒光染色標(biāo)本所需要的激發(fā)濾光片組轉(zhuǎn)入光路。激發(fā)濾光片組編號(hào)刻在濾片組轉(zhuǎn)換撥輪上。

濾光片選擇正確與否，是熒光顯微鏡能否得到正確應(yīng)用的關(guān)鍵。選用濾光片時(shí)，必須遵守斯托克斯定律：激發(fā)濾光片的透射波長(zhǎng)＜雙色束分離器的透射波長(zhǎng)＜阻斷濾光片的透射波長(zhǎng)。

由于激發(fā)濾光片、雙色束分離器和阻斷濾光片，出廠時(shí)已按其用途和本身的光學(xué)特性進(jìn)行了嚴(yán)格的組合匹配，在觀察和攝影時(shí)，只需選擇濾光片組即可。

（4）調(diào)節(jié)粗調(diào)手輪，當(dāng)看清熒光圖像輪廓后，再用微調(diào)手輪調(diào)焦，直至看到清晰的熒光圖像。

（5）當(dāng)需要得到較強(qiáng)的熒光圖像時(shí)，可轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡旋鈕把聚光鏡移入光路，可獲得較明亮的熒光圖像。

（6）當(dāng)需要使用40×或100×熒光物鏡觀察時(shí)，應(yīng)在標(biāo)本和物鏡間加上甘油，油中不能有影響觀察的小泡或雜質(zhì)。使用時(shí)可使甘油慢慢浸潤(rùn)一會(huì)兒，然后輕輕左右來(lái)回轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器以排除氣泡。

6.熒光顯微攝影--顯微鏡攝像頭

（1）由于熒光圖像一般均較明場(chǎng)觀察暗得多，所以進(jìn)行熒光顯微攝影需要較長(zhǎng)的曝光時(shí)間，在曝光時(shí)應(yīng)注意避免儀器震動(dòng)。

（2）熒光顯微鏡攝影技術(shù)對(duì)于記錄熒光圖像十分必要，由于熒光很易褪色減弱，要即時(shí)攝影記錄結(jié)果。方法與普通顯微攝影技術(shù)基本相同。因紫外光對(duì)熒光猝滅作用大。